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1. 基因修饰小鼠的构建

(1)     转基因小鼠

借助于原核注射将过表达的转基因载体注射到大鼠受精卵的原核中，经过胚胎移植，最终得到基因修饰的个体。

(2)     基因敲除/敲入小鼠

将基因敲除/敲入的载体注射到小鼠受精卵的原核中，经过胚胎移植，最终获得基因敲除/敲入的小鼠。

(3)     嵌合体小鼠

用胚胎注射的方法，将经过基因修饰的小鼠多能性干细胞作为供体细胞注入受体囊胚或者4-/8-细胞受体胚胎中，经过在受体母鼠体内的发育最终获得嵌合体小鼠。

2. 基因修饰大鼠的构建

(1)     转基因大鼠，基因敲除/敲入大鼠

借助于原核注射将过表达的转基因载体或者基因敲除（入）载体注射到大鼠受精卵的原核中，经过胚胎移植，最终得到基因修饰的个体。

(2)     嵌合体大鼠

通过显微注射的方法，将经过基因修饰的大鼠多能性干细胞注入囊胚或者4-/8-细胞胚胎中，经过体内的发育最终获得嵌合体大鼠。

3. 基因修饰鸡的构建

从鸡的早期胚胎中分离得到PGCs，在体外培养扩增后，通过电转染的方法对其进行基因修饰，然后将所得到的阳性细胞注射入受体胚胎中，供体PGCs会自发地定位于受体胚胎的性腺中，最终获得有生殖系嵌合能力的基因修饰鸡。

 

 

4. 转基因克隆猪的构建

体细胞核移植 (Somatic cell nuclear transfer, SCNT) 的方法最早于2000年被报道用来构建转基因克隆猪，而农业生物技术国家重点实验室早在2005年就建立了猪体细胞核移植平台，经过十多年的优化，我们现在拥有稳定、高效的转基因克隆猪的生产平台，实验流程如下图中左图所示所示，右图为我们构建的转基因克隆猪。

5. 利用piggyBac转座子介导的高效的转基因系统

 

PiggyBac (PB) 转座子作为一类以剪切-粘贴方式进行转座的DNA转座子首先在卷心菜尺蠖中发现，随后Nagy、Bradley、吴森等课题组旋即成功利用PB转座子在人、小鼠、大鼠等哺乳动物中实现高效率的转基因及基因捕获。与普通的转基因系统相比，PB介导的转基因效率要高出数倍之多。我中心的吴森教授前期利用PB做了大量工作，积累了丰富的经验。

6. 基于CRISPR-Cas9的基因修饰系统

CRISPR-Cas9系统是微生物识别并切割病毒DNA或RNA的一种免疫机制，2013年在哺乳动物细胞中重建成功，实现了高效地基因敲除。CRISPR-Cas系统利用靶向RNA引导Cas9蛋白定向切割基因组序列，因此只要设计不同的靶向RNA就能实现基因组不同位点的突变，除此之外， CRISPR-Cas系统还能够介导高效的同源重组，可以较大地提高基因定点敲入的效率。不久，Jaenisch课题组介绍了利用原核注射Cas9 mRNA和sgRNA的方法生产单基因、多基因敲除的小鼠，而且通过同时注射短寡核苷酸或打靶质粒还能成功实现敲入和条件性敲除。该方法革新了传统基因打靶技术，解除了基因打靶对胚胎干细胞的依赖，对于那些尚未成功建立胚胎干细胞系的物种能实现和小鼠一样的遗传操作带来了希望。

我中心已经构建了大量的CRISPR-Cas载体，能够熟练利用这一系统对各种细胞系和大/小鼠的受精卵进行基因修饰。

 

7. 联系方式

联系人：冯涛 博士

联系电话：010-62733075/13263230659